血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現，該如何處理？

血清中沉淀物的出現有許多原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性造成的；而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成血清沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。

若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管中，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物，因為它可能會阻塞您的過濾膜。
支原體污染的來源包括工作環境的污染、操作者本身的污染（某些支原體在人體是正常菌群）、培養基的污染、被污染細胞造成的交叉污染、實驗器材的污染、制備細胞的原始組織或器官的污染，等等。

體外生長的細胞對微生物及一些有害有毒物質沒有抵抗能力，因此培養基應達到無化學物質污染、無微生物污染（如細菌、真菌、支原體、病毒等）、無其他對細胞產生損傷作用的生物活性物質污染（如抗體、補體）。對于天然培養基，污染主要來源于取材過程及生物材料本身，應當嚴格選材，嚴格操作。對于合成培養基，污染主要來源于配制過程，配制所用的水，器皿應十分潔凈，配制后應嚴格過濾除菌。

由于體外培養細胞自身沒有抵抗污染的能力，而且培養基中的抗生素抗污染能力有限，因而培養細胞一旦發生污染多數將無法挽回。支原體污染后，因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存，培養基一般不發生渾濁，細胞無明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實則細胞手到多方面潛在影響，如引起細胞變形，影響DNA合成，抑制細胞生長等。

組織細胞培養工作中，可以從以下幾方面來預防支原體的污染：控制環境污染；嚴格實驗操作；細胞培養基和器材要保證無菌；在細胞培養基沖加入適量的抗生素。

抗生素主要用于消毒培養液，是培養過程中預防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不嚴重時的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同，應根據需要選擇。

在細胞培養過程中如果發現破碎的細胞甚多，培養細胞需要頻繁改善營養環境才能支持長期傳代培養時，應該懷疑支原體污染。支原體污染難以觀察特殊的外觀變化，培養液也不渾濁。

支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要清除支原體，常用方法有：抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補體聯合處理。要注意的是：支原體沒有細胞壁，故作用于細胞壁生物合成的抗生素，如內酰胺類、萬古霉素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺藥物普遍耐火物品。對支原體zui有抑制活性抗生素是四環素類、大環內酯類等，氨基糖苷類、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時更換所有培養用物。通常，濾過除菌的方法對支原體是沒有作用的。

不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源，所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。

5 何謂FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 兩者都是指胎牛血清， FCS 乃錯誤的使用字眼， 請不要再使用。CS (calf serum) 則是指小牛血清。HS (horseserum) 則是指馬血清。

6 培養細胞時應使用5 % 或10% CO2？或根本沒有影響？

一般培養基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統， 而培養基中NaHCO3 的含量將決定細胞培養時應使用的CO2 濃度。當培養基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時，細胞培養時應使用10 % CO2；當培養基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時， 則應使用5 % CO2 培養細胞。

7.Hank's 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用，不需要CO2培養箱。原因是什么？Hank's 平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別？

HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。

8. 細胞之接種密度為何？

依照細胞株基本數據上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。

9. 懸浮性細胞應如何繼代處理？

一般僅需持續加入新鮮培養基于原培養角瓶中， 稀釋細胞濃度即可，若培養液太多時， 可將培養角瓶口端稍微抬高， 直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養液至另一新的培養角瓶， 加入新鮮培養基稀釋至適當濃度， 重復前述步驟即可。