結腸炎模型誘導方案

結腸炎模型誘導方案

背景簡介：

腸炎是一種病因不明的多因素疾病，主要的腸炎有2種，潰瘍性結腸炎和克羅恩病。潰瘍性結腸炎主要影響大腸或結腸，而可能影響胃腸道的任何部分。為了研究潰瘍性結腸炎，葡聚糖硫酸鈉（DSS）常被用于誘導實驗動物的結腸炎通過調整DSS濃度或給藥周期，很容易誘發急性、慢性或復發性結腸炎。我公司為科研用戶提供用于誘導結腸炎的右旋糖酐硫酸鈉（DSS），以及評估其特征和并發癥的工具，用于模擬人結腸炎。

操作流程：

1）急性腸炎造模：選取成年動物正常飼養1-2周→2-5%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征。

2) 慢性腸炎造模：選取成年動物正常飼養1-2周→2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→停止飲用DSS，改正常飲水7-14天→重復2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→重復停止飲用DSS，改正常飲水7-14天

3) 灌胃造模：每天分別于10:00, 14:00和18:00給予2%DSS溶液灌胃，每次30ml/kg，不另予飲水。每天末次灌胃后給予足量混合配方顆粒飼料，次日8:00取走飼料。造模時間9天。

常見問題

1. Q: 成功誘導結腸炎動物模型的關鍵因素是什么？

A: DSS的分子量、DSS溶液的濃度、動物的種類和品系以及提供給動物的飼料種類。

2. Q: DSS造模的操作流程？

1）急性腸炎造模：選取成年動物正常飼養1-2周→2-5%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征。

2) 慢性腸炎造模：選取成年動物正常飼養1-2周→2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→停止飲用DSS，改正常飲水7-14天→重復2-3%DSS自由飲5-7天觀察癥狀體征→重復停止飲用DSS，改正常飲水7-14天

3) 灌胃造模：每天分別于10:00, 14:00和18:00給予2%DSS溶液灌胃，每次30ml/kg，不另予飲水。每天末次灌胃后給予足量混合配方顆粒飼料，次日8:00取走飼料。造模時間9天。 參考文獻：葡聚糖硫酸鈉自由飲用與定量灌胃誘導小鼠急性結腸炎模型的比較研究，胃腸病學 2009，14（1），27-30。

3. Q: 誘導結腸炎動物模型時需要注意哪些條件？

1) 用無菌水配制DSS溶液，詳細的濃度請參考我們的應用指南。使用前，建議使用 0.22 µm的過濾。

2) 每1-2天更換一次新配置的DSS溶液。

3) 為了清楚地觀察造模進展, 建議每個籠子2-3只動物，最多不超過每個籠子5只動物。

4) 使所有動物的生存條件一致。

4. Q: DSS引起結腸炎的原理是什么？

參考文獻：Gastroenterology, 2002, 123(1):256-270;J Immunol, 2004, 172(9): 5664-5675; 胃腸病學和肝病學雜志 2013, 22(12): 1221-1224; 炎性腸病，1998，124-125；J Pharmacol Toxi-colog Methods, 2004, 50(1):81-81

5. Q: 小鼠和大鼠每天的飲水量是多少？

小鼠每天的飲水量為7-10ml，大鼠11ml/100g體重/天。

6. Q: 分子量是否影響結腸炎模型的建立結果？

36,000 - 50,000Da是結腸炎模型建立的最佳DSS分子量范圍。低分子量DSS具有較弱的炎性作用，分子量越大，吸收越困難。

7. Q: 為什么不同批次的DSS使用濃度會有差異？

DSS是葡聚糖聚合物，分子量為平均分子量，每個批次之間會有分子量的差異，而分子量對腸炎造模有影響。通常DSS批間比較穩定，但是也有少部分批間差會大一些，所以建議客戶根據自己的實驗需求，購買足夠的同一批次產品，或者換用批次之前進行預實驗。

8. Q: 小鼠3%的DSS飲用3天后沒有出現明顯的體重下降？

某些動物出現反應慢，甚至在飲用DSS第5天才出現體重下降，屬于正常現象。如果7天未出現明顯癥狀，則重新進行實驗，并增加0.5-1%的DSS的飲用濃度。

9. Q: DSS造模后出現小腸出血正常嗎？

DSS飲用濃度過高會導致小腸出血，輕度小腸出血無明顯影響，若出血過多，可降低DSS的濃度。

10. Q: DSS飲用后體重下降明顯，但是病理切片HE染色沒有炎癥現象

DSS的飲用達到一定閾值才能成功誘導腸炎，閾值如果達不到，體重可以出現下降，但是病理無炎癥表現。

11. Q: 為什么同一籠的小鼠出現的癥狀有差異？

動物之間存在個體差異，不同的動物飲水量可能不同，而且不同的動物對DSS的耐受性也不同。

12. Q: 為什么慢性腸炎模型的第二個周期飲用相同濃度的DSS，動物出現的癥狀沒有第一個周期明顯？

動物飲用DSS一段時間后會有耐受性，所以第二個周期出現癥狀減弱為正常現象。

13. Q: DSS造模與TNBS造模有什么不同？

TNBS誘導的腸炎與克隆恩病相似，與潰瘍性結腸炎相似度低。TNBS致炎病程更長，個體差異更大。

14. Q: 是否可以高壓滅菌？

不可以，會導致DSS的分子結構發生變化。

15. Q: 從DSS誘導小鼠的糞便樣本中提取DNA，結腸組織中提取的RNA中會有DSS殘留，會抑制下游PCR，RT-PCR實驗，如何處理？

精胺可以去除DSS對PCR的抑制。參考文獻：Journal of Microbiological Methods ，2018 Jan, 144: 1-7

16. Q: DSS造模期間是否可以進行不同時間點的檢測，觀察DSS飲用前期什么時間會造成上皮屏障破壞？

可以，一般2天造成上皮屏障破壞，可以選擇3、5、7天；進行病理檢測。

17. Q: 小鼠與大鼠的品系？

小鼠常用品系C57背景純，誘導腸炎更穩定。使用Babl/c小鼠時，要做好預實驗；大鼠常用品系SD和Wistar

18. Q: 小鼠的體重建議？

建議按照周齡來選擇，推薦8-12周小鼠，體重約22g左右。

19. Q: DSS可以用于細胞實驗嗎？

可以，參考文獻：YAP triggers the Wnt/β-catenin signaling pathway and promotes enterocyte self-renewal, regeneration and tumorigenesis after DSS-induced injury. cell death and disease, 2018(9):153

20. Q: DSS可以用超聲進行溶解嗎，會破壞其分子結構嗎？

DSS易溶解，無需超聲即可溶解。如果必須使用超聲，也是可以的。

21. Q: DSS除引起結腸損傷，還會引起肝臟，脾臟損傷嗎？

DSS除導致腸道損傷外，會加速非酒精性肝硬化的進展，部分客戶偶爾發現對正常動物的肝臟也會有損傷，但對脾臟的損傷未見有報道。

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