破骨細胞骨吸收檢測操作流程

骨切片Bone Slice

產品描述：

開始骨吸收實驗前用培養基重懸骨切片，成熟或早熟的破骨細胞，無論是由外周血單核細胞（PBMC）或共培養產生的，都可以將細胞分散覆蓋于骨切片上。根據破骨細胞的成熟形態和影響因素，凹點會在3-14天出現。破骨細胞數量可通過Tracp 活性實驗來觀察，吸收凹點和溝可通過甲苯藍染色觀察（如圖2.）。

來源：骨切片由牛股骨的皮質部分制成，適合96孔板，直徑6mm。

厚度：1）0.2mm（適用于免疫熒光，共聚焦實驗）。
        2）0.4mm（適用于下游分析）
儲存：置于4°C下96%乙醇中。
應用：用于骨吸收實驗檢測，通過破骨細胞的骨吸收形成的吸收坑，可以用來監測培養的破骨細胞的骨吸收情況，適合96孔板。

操作流程：

骨吸收實驗

簡介：

該方法提供一種易于檢測的定量方案，用于體外測定破骨細胞介導的骨吸收。破骨細胞接種于骨切片上，吸收坑的形成可以通過甲苯胺藍染色進行定量。

實驗材料和試劑：

1）  破骨細胞

2）  骨切片

3）  異丙醇

4）  甲苯胺藍（Sigma cat#198161）

5）  超純水

6）  96孔細胞培養板（Greiner , Cat#650185）

實驗設備：

1.       骨形態測量系統

2.       超聲波清洗器

操作流程：

1.       破骨細胞接種于（250000 細胞/孔）含和不含顱骨成骨細胞的96孔細胞培養板上（提前孔內放置骨切片）。

2.       細胞在合適的培養基中37℃培養至少14天。

3.       此后，用PBS洗滌細胞兩次，在250ul 70%異丙醇中，用超聲波高功率處理至少15分鐘，使細胞從骨切片脫落。

注意：250ul 70%異丙醇處理使細胞更容易從骨切片脫落。

4.       加入100ul 甲苯胺藍溶液（1%溶解于水），室溫染色2分鐘。

5.       用250ul 超純水沖洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的殘留物。

6.       吸收坑被染成深藍色（圖1），吸收坑面積可以通過骨測量系統進行量化或者吸收坑可通過光學顯微鏡觀察計數。

產品訂購：

更多產品詳情，請聯系Bone Slice 中國區總代理北京博蕾德生物科技有限公司。